Le protocole est basé sur la
mesure du volume de méthane produit à partir d’une quantité connue d’un
échantillon à tester en présence d’une quantité connue de
microorganismes anaérobies. L’essai se déroule dans des conditions
favorables (température, pH, présence d’éléments nutritifs…) pour la
dégradation de l’échantillon. Pour s’affranchir de l’activité endogène
des microorganismes utilisés et pour s’assurer de leur performance,
deux témoins sont réalisés systématiquement : un témoin dit « froid »
est réalisé sans échantillon, un témoin dit »chaud » avec inoculum et
éthanol s’assure que les bactéries sont actives. Le protocole a été mis
au point à partir de la norme ISO 11734.